Metoda Grama jest klasycznym barwieniem różnicującym bakterie na Gram-dodatnie i Gram-ujemne. Kluczowe jest zrozumienie, że w tej procedurze występuje barwnik podstawowy (pierwszy, nadający początkowy kolor wszystkim komórkom), etap utrwalania barwy (zwykle z udziałem roztworu jodu jako zaprawy), etap odbarwiania oraz często barwienie kontrastowe.
Odpowiedź "fioletu krystalicznego" jest poprawna, ponieważ to właśnie on pełni rolę barwnika podstawowego w barwieniu metodą Grama. Po nałożeniu na rozmaz barwi on komórki, a następnie w obecności zaprawy jodowej może tworzyć kompleks, który u bakterii Gram-dodatnich pozostaje w komórce po odbarwieniu. Dzięki temu w dalszej obserwacji mikroskopowej bakterie Gram-dodatnie utrzymują fioletowe zabarwienie, a Gram-ujemne po odbarwieniu mogą zostać zabarwione barwnikiem kontrastowym na inny kolor.
Dlaczego pozostałe propozycje nie pasują do pytania:
- "fuksyny fenolowej" – jest to odczynnik kojarzony z innymi technikami barwienia (np. barwieniami specjalnymi). Sam fakt, że jest barwnikiem, nie oznacza, że jest barwnikiem podstawowym w metodzie Grama.
- "zieleni malachitowej" – również należy do barwników używanych w mikrobiologii, ale typowo w innych procedurach niż barwienie Grama. Wybór tej odpowiedzi zwykle wynika z mylenia barwień specjalnych z barwieniem różnicującym.
- "nadmanganianu potasu" – jest przede wszystkim silnym utleniaczem, wykorzystywanym w różnych zastosowaniach chemicznych, ale nie stanowi standardowego barwnika podstawowego w metodzie Grama.
Wskazówka egzaminacyjna: jeśli pytanie dotyczy "metody Grama", najpierw przypomnij sobie sekwencję ról odczynników (barwnik podstawowy → zaprawa → odbarwiacz → barwnik kontrastowy). Dopiero potem dopasuj nazwę odczynnika do jego funkcji.
