KWALIFIKACJA CHM4 - CZERWIEC 2024

PYTANIE NR 28.
Na rysunku przedstawiono izolację czystych kultur bakterii metodą
Ilustracja przedstawia schemat posiewu bakterii na płytce Petriego, co jest związane z izolacją czystych kultur bakterii
A.
B.
C.
D.
Wyjaśnienie poprawnej odpowiedzi:
Poprawna jest odpowiedź "posiewu na całej powierzchni.", gdyż izolacja polega na równomiernym rozprowadzeniu zawiesiny po powierzchni podłoża stałego, aby uzyskać rozdzielone, pojedyncze kolonie. Pozostałe metody mają inny schemat wykonania: sektory, rozcieńczenia lub wymieszanie z agarem.

Pełne wyjaśnienie:

Izolacja czystych kultur bakterii polega na takim wykonaniu posiewu, aby z mieszaniny komórek (lub materiału zawierającego różne drobnoustroje) uzyskać pojedyncze, odseparowane kolonie. Z pojedynczej kolonii można następnie wykonać przeszczep i otrzymać czystą kulturę do dalszych badań analitycznych.

Odpowiedź "posiewu na całej powierzchni." odnosi się do techniki, w której inokulum jest nanoszone na agar i rozprowadzane równomiernie po powierzchni (typowo jałową głaszczką). Celem jest uzyskanie rozproszonych komórek, które po inkubacji utworzą oddzielne kolonie możliwe do pobrania.

Dlaczego pozostałe odpowiedzi nie pasują do izolacji opisanej jako posiew na całej powierzchni?

  • "kolejnych rozcieńczeń." to podejście, w którym stopniowo rozcieńcza się próbkę (np. w roztworze jałowym), a następnie wysiewa określoną objętość. Izolacja wynika tu przede wszystkim ze spadku liczby komórek w kolejnych rozcieńczeniach, a nie z samego sposobu rozprowadzenia po płytce.
  • "sektorowo - redukcyjną." (streak plate) polega na wykonywaniu posiewu w strefach/sektorach w celu stopniowego "rozcieńczania" materiału na powierzchni agaru przez kolejne pociągnięcia ezą. Charakterystyczne są smugi i sektory, a nie równomierne pokrycie całej płytki.
  • "płytek lanych." (pour plate) polega na zmieszaniu inokulum z płynnym, schłodzonym agarem i zalaniu płytki. Kolonie mogą wtedy pojawiać się w masie podłoża i na powierzchni, co odróżnia tę metodę od klasycznego posiewu powierzchniowego.

W praktyce laboratoryjnej technik analityk powinien kojarzyć, że wybór metody zależy od celu: izolacja czystej kultury często opiera się na technikach powierzchniowych (rozprowadzanie lub sektory), natomiast rozcieńczenia i płytki lane są typowe również dla oznaczeń ilościowych (np. liczby jednostek tworzących kolonie).

Dodatkowe pytania

Dodatkowe pytania (FAQ):
Izolacja czystej kultury to uzyskanie hodowli zawierającej jeden gatunek (jeden typ) drobnoustroju, zwykle przez wyhodowanie pojedynczych, odseparowanych kolonii na podłożu stałym i wykonanie przeszczepu z jednej kolonii.
W posiewie na całej powierzchni materiał rozprowadza się równomiernie po powierzchni agaru (np. jałową głaszczką). Po inkubacji komórki rosną w postaci rozdzielonych kolonii, które można wybrać do uzyskania czystej kultury.
Posiew sektorowy polega na stopniowym "rozrzedzaniu" materiału na płytce poprzez kolejne smugi w sektorach. W kolejnych sektorach liczba przenoszonych komórek spada, dzięki czemu na końcu pojawiają się pojedyncze, łatwe do pobrania kolonie.
W płytkach lanych inokulum miesza się z płynnym agarem i dopiero wtedy wylewa na płytkę. Kolonie mogą rosnąć także w głębi podłoża. W posiewie powierzchniowym materiał pozostaje na powierzchni agaru i tam tworzą się kolonie.
Metodę kolejnych rozcieńczeń stosuje się, gdy próbka zawiera bardzo dużo drobnoustrojów i trzeba zmniejszyć ich liczbę, aby uzyskać policzalne lub rozdzielone kolonie. Jest to częste w analizie ilościowej oraz przy pracy z materiałem silnie zanieczyszczonym.
Typowe błędy to: brak zachowania jałowości (kontaminacje), zbyt gęsty wysiew (zlane kolonie), niedostateczne wyjałowienie narzędzi, zbyt mokra powierzchnia agaru oraz nieprawidłowa inkubacja. Każdy z nich utrudnia uzyskanie pojedynczej kolonii.
Najczęściej tak, jeśli kolonia jest wyraźnie odseparowana i pochodzi z pojedynczej komórki lub skupiska jednego typu. Gdy kolonie są zlane lub bardzo blisko siebie, istnieje ryzyko pobrania mieszaniny. Wtedy warto powtórzyć izolację.
Posiew powierzchniowy zwykle daje równomierne rozprowadzenie materiału na całej płytce (brak wyraźnych sektorów). Posiew sektorowy ma charakterystyczne smugi i podział na strefy o malejącej gęstości wzrostu, co wynika z kolejnych pociągnięć ezą.
Izolacja ma prowadzić do uzyskania jednego drobnoustroju. Nawet niewielkie zanieczyszczenie z powietrza, rąk lub sprzętu może wprowadzić obce bakterie/grzyby, które wyrosną na płytce i uniemożliwią wiarygodny wybór kolonii do dalszych badań.
Warto ćwiczyć rozpoznawanie technik po efektach na płytce: równomierne rozprowadzenie (posiew powierzchniowy), smugi w sektorach (sektorowy), kolonie także w głębi (płytki lane) oraz zależność gęstości kolonii od rozcieńczenia (rozcieńczenia). Pomaga praca ze zdjęciami.
info

Statystycznie 46% uczniów zna prawidłową odpowiedź. trudne

Eksperci podkreślają: "Poprawna jest odpowiedź "posiewu na całej powierzchni.", gdyż izolacja polega na równomiernym rozprowadzeniu zawiesiny po powierzchni podłoża stałego, aby uzyskać rozdzielone, pojedyncze kolonie."

Źródła:

  • https://en.wikipedia.org/wiki/Streaking_(microbiology) - accessed 2026-03-01
  • https://en.wikipedia.org/wiki/Plate_count - accessed 2026-03-01
  • https://en.wikipedia.org/wiki/Microbial_culture#Pour_plate_method - accessed 2026-03-01

Materiały:

  • Instrukcje BHP i jałowej pracy w pracowni mikrobiologicznej (materiały szkolne/laboratoryjne)
  • Podręczniki i skrypty z mikrobiologii ogólnej (techniki posiewu, izolacja kolonii)
  • Materiały dydaktyczne z rozróżniania: spread plate, streak plate, pour plate (atlasy/opracowania z fotografiami płytek)

Aktualizacja pytania: 03.04.2026



Aktualizacja pytania: 03.04.2026
📡 Brak połączenia internetowego